Phương pháp của xét nghiệp dựa trên huỳnh quang, xét nghiệm bao gồm quá trình oxy hóa cơ chất glucose-6-phosphate (G-6-P) thành 6-phosphogluconate (6-PG), bởi G6PD có trong mẫu máu khô và đồng thời khử NADP thành NADPH. Vết máu khô được phản ứng với thuốc thử cơ chất bao gồm G-6-P và NADP trong 30 phút ở nhiệt độ môi trường. Đồng sulfate được thêm vào để làm chậm phản ứng. Độ huỳnh quang được đo bằng bước sóng kích thích 355 nm và bước sóng phát xạ 460 nm.